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Intro ......

 

응용면에서는 이론적으로 액체 크로마토그래피와 대단히 비슷하다. 요 즘 대부분의 평면 크로마토그래피는 TLC에 바탕을 두고 있다. . TLC는 제 약업계에서 중요한 생산품의 순도 측청과 임상의학, 플라스틱, 용매를 증 발시킨 후에 이것을 이동상 용매가 들어있는 전개장치 속에 시료의 위치가 용매에 잠기지 않 도록 위치시킨다. 모세관이나 마이크로 피펫을 사용하여 시료용액 한 방울을 전 개판의 끝에서 1～2㎝되는 지점에서 점적한다. 3. Subject : TLC와 HPLC를 통한 당분석 2.1～1㎍/㎕ 정도의 묽은 용액시료를 소량 묻힌다.zip TLC와HPLC에의한당분석 TLC와 HPLC에 의한 당분석 에 대한 내용 입니다. 박층 크로마토그래피에서는 정지 상이 평면으로 되어 있고 자체-지지체 또는 유리, 1928년에 처음으로  ......

 

 

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TLC와HPLC에의한당분석

 

TLC와 HPLC에 의한 당분석 에 대한 내용 입니다. TLC와HPLC에의한당분석

 

1. Subject : TLC와 HPLC를 통한 당분석

 

2. Object : TLC와 HPLC의 원리, 구성 및 조작방법을 이해함으로써, 그것들을 이용하여 당 분석 실험을 수행할 수 있다.

 

3. Principles

(1) 박층 크로마토그래피(thin layer chromatography, TLC)

크로마토그래피에는 기체나 액체 크로마토그래피와 같이 관을 사용하는 것과 얇은 막(thin layer)이나 종이를 이용하는 박층 크로마토그래피가 있다. 박층 크로마토그래피에서는 정지 상이 평면으로 되어 있고 자체-지지체 또는 유리, 플라스틱, 금속판 위에 지지되어 있는 얇 은 물질층으로 되어 있다. 이동상으로 사용하는 용매는 모세관 작용을 통해 때로는 중력이나 전기적 전위의 도움을 받아 정지상을 통하여 이동한다. 역사적으로 거름종이를 정지상으로 사용하는 종이 크로마토그래피는 19세기 중반에 처음으로 사용되었다. 그러나 이 방법이 물 질분리법으로서의 유용성을 평가받게 된 것은 1940년대 후반부터였다.

TLC에서는 정지상이 유리판 위의 표면에 도포된 혹은 도포되지 않고 가는 분말의 얇은 막 으로 구성되었고, 1928년에 처음으로 소개된 방법이지만 오늘날에는 가는 유리판에 실리카겔 을 얇게 도포시켜서 사용하기도 하며 여기에서 분리된 성분은 불꽃이온화 검출기(FID)로써 자동적으로 검출되어 크로마토그램을 얻을 수 있도록 자동화된 TLC도 가능하게 되었다. 요 즘 대부분의 평면 크로마토그래피는 TLC에 바탕을 두고 있다. 이 방법은 분석시간이 빠르 고 분리능이 좋은 것으로 알려져 있다.

1) TLC의 원리

TLC의 정지상과 이동상의 종류, 응용면에서는 이론적으로 액체 크로마토그래피와 대단히 비슷하다. 실제로 TLC는 액체 크로마토그래피 분리의 최적조건을 개발하는데 유용하게 응용 할 수 있다. 이 경우 TLC의 빠른 용리속도와 낮은 비용이 큰 이점으로 작용한다. TLC는 제 약업계에서 중요한 생산품의 순도 측청과 임상의학, 생화학, 유전공학, 화학공장의 실험실에서 널리 쓰이고 있다.

일반적으로 박층으로 도포된 판의 정지상(전개판)에 휘발성 용매에 녹인 0.1～1㎍/㎕ 정도의 묽은 용액시료를 소량 묻힌다. 모세관이나 마이크로 피펫을 사용하여 시료용액 한 방울을 전 개판의 끝에서 1～2㎝되는 지점에서 점적한다. 점적이 끝나면 그 위치를 표시하고, 용매를 증 발시킨 후에 이것을 이동상 용매가 들어있는 전개장치 속에 시료의 위치가 용매에 잠기지 않 도록 위치시킨다. 이렇게 하면 모세관 현상에 의하여 이동상이 흐르게 되어 크로마토그램을 전개한다. 전개가 완료되었다고 판단되면 이동상의 흐름을 정지하고 용매 흐름의 최고점을 표 시한다. 전개장치에서 전개관을 꺼내어 용매를 증발시킨 다음에 분리된 성분의 위치를 확인한 다.

분리된 각 성분의 위치를 확인하는 방법에는 일반적으로 성분의 위치가 눈에 보이도록 발색 시약을 전개판에 분무하는 간단한 방법이 가능할 때가 있다.

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