의학,약학 자료 생명과학실험 - 광합성색소의 분리 Report LH

의학,약학 자료 생명과학실험 - 광합성색소의 분리 Report
 

실 험 보 고 서

목 적
박층크로마토그래피(TLC)로 식물의 광합성 색소를 분리하고 각 분획별 색소의
이화학적 특성을 조사한다.
재료 및 기기
재 료
기 기
시금치 잎
유 발
아세톤
탁상용 원심분리기
에테르
크로마토그래피 챔버
Whatmann 종이
UV / VIS spectrophotometer
전개용매
에테르:아세톤〓9:1
실험 방법(내용)
특이사항
1. 광합성 색소의 분리
1) 일정량의 시금치 잎(1g 정도로 시금치 잎 두장 정도면 충분)을
유발에 넣고 아세톤 5㎖를 첨가한 후, 막자사발로 곱게 간다.
2) 세포잔사를 제거하지 않은 상태에서 다음 단계인 크로마토그래프
에 사용한다.
2. 크로마토그래피에 의한 색소의 분획
1) 여과지를 15 X 2㎝ 되게 자른다. 그림과 같이 1㎝되는 곳을 잘라
삼각형을 만든다음 이곳으로부터 2㎝되는 곳에 연필로 선을 긋는다.
이때 여과지를 손으로 만지지 않도록 한다.
2) 모세관을 이용하여 준비된 엽록소 추출액을 연필로 그은선 중앙에
점적한다. 이때 점적한 부분이 가능한 작은원이 되도록 한다. 헤어 드라이어를 사용하여 완전히 말린후 4-5회 정도 반복하여 점적한다.
3) 핀으로 여과지를 시험관 마개에 매달고 전기용매가 들어있는 시험관
에 넣는다. 여과지가 시험관 벽면에 닿지 않도록 주의하고 전기용매
의 끝에서 0.5㎝정도만 잠기도록 한다.(마개를 완전히 닫지 않으면
전개액이 증발하므로 주의한다.)
4) 전개액이 여과지 위에서 1.0㎝ 정도까지 전개되었을 때 여과지를
꺼내어 전개액이 전개된 부분을 연필로 표시한 후 여과지를 완전히
말린다.
5) 점적한 부분에서 가장 가까운 곳의 노란색을 띤 녹색의 밴드가 엽록
소 b이고 그위에 푸른색을 띤 녹색밴드가 엽록소 a 이며 그 위쪽으
로 몇 개의 크산토필 밴드가 나타난다. 전개액이 전개된 가장 위쪽 의 노란색 밴드가 나타난다. 각각의 밴드의 Rf값을 다음의 식으로부 터구한다.
[ Rf 〓 특정 색소가 이동한 거리 / 전개액이 이동한 거리 ]
6) 다른 색소 밴드가 썩이지 않도록 주의하며 엽록소 a를 잘라 내어
시험관에 넣고 아세톤 2㎖를 부어 유리막대로 잘 저어준다.
7) UV / VIS spectrophotometer을 이용하여 380㎚에서 700㎚까지의
파장…(생략)
 

    
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